产品货号：
JN0075
中文名称：
DNA聚合酶I(大肠杆菌)
英文名称：
E.coli DNA Polymerase I
产品规格：
250U|1250U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是将DNA Polymerase I（E.coli）在大肠杆菌中进行表达后，经多次纯化分离而得到的DNA聚合酶。DNA Polymerase I（E.coli）具有双链特异性的5'→3'外切核酸酶活性以及单链特异性的3'→5'外切核酸酶的活性。该酶具有的5'→3'核酸外切酶活性能够切除位于延伸链前端的核苷酸，从而使切割平移成为可能。
DNA Polymerase I在活细胞内的功能，主要是对复制中的错误进行校读，对复制和修复中出现的空隙进行填补。
- DNA切刻平移(DNase I一起使用)；
- cDNA第二条链的合成。
| 组分 | 250U | 1250U |
| DNA Polymerase I(5U/μL) | 50μL | 5×50μL |
| 10×DNA Polymerase I buffer | 1mL | 5×1mL |
保存：-20℃
以合成的Poly d（A-T）DNA为模板/引物，在37℃、pH7.4的条件下，30分钟内使10nmol的全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
- 操作时动作要轻柔，剧烈搅拌会使酶失活。
- 本品不含内切酶活性，单独使用不表现切口平移活性。
- 由于同DNA有较强的亲和性，过量使用酶，会由于凝集作用而抑制反应进行。
切口平移反应，操作步骤如下：
- 试剂融化后，在冰上配制如下反应体系:
成分 用量 待标记的DNA 1μg 10×DNA Polymerase I Buffer 5μL 未标记的dNTPs(10mM) 2μL [α32P]dCTP或dATP(70μCi) 7μL DNA Polymerase I(5U/μL) 1μL DNase I(1U/μL) 1μL ddH2O 至50μL - 15℃孵育60分钟。
- 75℃加热20分钟终止反应。
- 可以用乙醇沉淀法回收DNA。
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